反向遺傳操作技術(reverse genetics)是指通過構建病毒感染性分子克隆,在病毒cDNA分子水平上進行體外人工改造來研究病毒的生物學功能,已稱“病毒拯救”。建立病毒反向遺傳操作系統主要包括基因組全長cDNA克隆及改造(如進行基因突變、缺失、插入等)、輔助質粒的構建、共轉染拯救病毒粒子和鑒定新生病毒與應用等內容。以此來研究病毒的基因功能與宿主間的相互作用關系、構建新型病毒載體及新疫苗研制。海隆生物技術團隊擁有豐富的RNA病毒拯救經驗和服務平臺,為客戶提供優質服務
大腸桿菌表達是最早用于表達重組蛋白的宿主菌。其遺傳背景清晰,生產過程安全可控,在蛋白表達的各個系統中,是最主要的工具。其增殖時間較短、純化方便、穩定性好,使得評估重組蛋白在大腸桿菌的表達時,僅需要1~2周時間。相較于其他表達系統,大腸桿菌工程菌對重組蛋白的表達水平更高,其中胞質表達的重組蛋白產量通常可占到總蛋白量的30%。而大腸桿菌培養基的組成簡單價格低廉,使大規模生產過程簡便易行。海隆生物技術團隊有豐富的大腸桿菌系統蛋白表達經驗。針對于有些外源基因在大腸桿菌中重組表達會形成膜包裹的高密度、不溶性蛋白質的包涵體的情況,我們會進行表達系統優化,盡量降低形成包涵體的幾率。同時我們會通過評估確定最佳的復性條件,進行溫和的包涵體変復性。我們提供的復性蛋白純度在95%以上。
桿狀病毒表達系統(baculovirus expression vector system, BEVS)自1983年問世以來廣泛應用于各種重組蛋白的生產。其表達的外源蛋白在細胞內進行正確折疊及翻譯后加工修飾(包括糖基化、磷酸化、酰基化等),表達的重組蛋白具有完整的生物學功能。能很好的保證用于制作疫苗的蛋白的免疫原性。此外昆蟲細胞懸浮生長,容易放大培養,有利于大規模表達重組蛋白。海隆生物提供快速、高效、經濟的昆蟲桿狀病毒表達系統重組蛋白生產。我們的技術人員擁有豐富的昆蟲桿狀病毒表達重組蛋白的經驗,特別是針對于對細胞有毒性的病毒蛋白有豐富的表達經驗。我們的技術人員會根據蛋白的具體性質優化在昆蟲桿狀病毒表達系統中的產量,提高蛋白的表達量。
哺乳動物細胞表達系統能夠為重組蛋白提供最接近于天然狀態的翻譯后修飾,在蛋白表達過程中會形成接近天然蛋白的蛋白質折疊和聚合,具備活性蛋白所必須的空間結構和修飾。在活性方面遠勝于原核表達系統及酵母、昆蟲細胞等真核表達系統,更接近于天然蛋白質。這一特性使得哺乳動物細胞表達系統在重組蛋白,特別是糖基化的病毒囊膜蛋白的研發和生產中具有重要意義。海隆生物哺乳動物細胞蛋白表達技術團隊擁有豐富的CHO及HEK293細胞表達經驗,其成熟的哺乳動物蛋白表達系統及純化服務平臺,提供哺乳動物蛋白表達系統的表達、純化及疫苗制備服務。
